一、仪器简介

激光共聚焦扫描显微镜（Confocal laser scanning microscope，CLSM）用激光作扫描光源，逐点、逐行、逐面快速扫描成像。激光共聚焦扫描显微镜既可以用于观察细胞形态，也可以用于细胞内生化成分的定量分析、光密度统计以及细胞形态的测量, 配合焦点稳定系统可以实现长时间活细胞动态观察。

二、技术参数

1.工作条件：

1)220V±10﹪、50Hz、16A供电，运行环境温度：15 –25℃

2)其它：防尘，除湿，抗震动，电源插头符合中国制式，或提供转接插座。

2.激光器：

1)640nm固体激光：功率50mw；

2)561nm固体激光：功率50mw；

3)488nm固体激光：功率50mw；

4)405nm固体激光：功率50mw；

3.扫描系统（速度、分辨率）

1)检流计式扫描速度：10幅/秒（512Χ512分辨率）,200幅/秒（512Χ16分辨率）

2)共振式扫描模式： 30幅/秒（512Χ512分辨率下），60幅/秒（256Χ256分辨率），720幅/秒（512Χ16分辨率下）；

3)大幅面光刺激共振扫描速度：15幅/秒（1024Χ1024分辨率下）；

4)扫描视野：25mm；

5)快速拼大图：40X物镜下，四色荧光拼接25mmx25mm范围的图片，亮度正常情况下周期为168秒；

6)扫描像素点最大：4096 X 4096；

7)扫描方式：包括X-Y-Z-t-入-Point的六维任意组合；

8)旋转扫描：在样品预览扫描方式时，可以进行360°任意旋转扫描线的方向；

9)针孔规格：全自动调节型六边形针孔（12-256μm）；

10)扫描变倍范围：0.72-1000倍；

4.检测系统：

1)标配4个或以上荧光通道探测器，包括2个GaAsp高灵敏度探测器；

2)滤光片选择满足12个波长需求，具体波长视使用者情况而定；

3)透射光通道检测方法：微分干涉相衬法检验（专用透射检测器）；

4)32通道光谱探测器实时光谱拆分，1秒内获得32通道光谱图像；

5)光谱拆分精度：2.5nm，光谱扫描步进：0.25nm；

5.高分辨率成像系统：

1)X-Y方向（水平）极限分辨率： 120nm（共聚焦分辨率的1.5X）；

2)Z轴分辨率：约50nm

3)所有适合配置激光器激发的荧光样品都可以进行高分辨率成像，无需选择特定的荧光染料。

4)高分辨率成像为线性成像,具有在高分辨率成像模式下完成定量分析的功能；

5)高分辨率可以在所有物镜倍率情况下提高分辨率至1.5倍，极限为120nm；

6.全自动倒置显微镜系统：

1)CFI60无限远光学系统，具有更高分辨率或更长工作距离优势；

2)主机机身高效率U型光路设计，自带17个传感器，遇到不良环境或者使用者误操作，实现自我保护，以免损坏显微镜；

3)电控部件：电动控制Z轴、物镜转盘、载物台、滤色镜转盘、切转观察方式等；

4)图像输出端口：25mm直径范围，用以配套25mm大视野扫描范围的共聚焦系统或大尺寸芯片CCD，可实现拍摄目镜视野下看不到的图像，适应拍摄皮氏培养皿大部分活细胞的培养范围情况，左、右端口输出比例均为100%；

5)后焦面可视化技术：内置辅助相机（100万有效像素以上），分光比70%/30%，可方便查看并确认后焦面像和标本像，使显微镜达到最佳状态；

6)可以选择I-pad和外接液晶触摸控制设备：遥控显微镜各项电动部件；

7)透射照明：复眼照明，保证100%均匀亮度，LED长寿命冷光源灯泡，寿命超过6万小时，带有系列滤光镜：色温片、绿色镜、隔热片、衰减片；

8)编码型电动载物台，可供进行活细胞观察，万向节调节x、y、z，带智能记忆，X、Y移动距离：114x73mm，移动速度可调，25mm/秒，配套磁性万能标本夹精度；

9)电动聚光镜系统：七工位，配套包括DIC 10X-100X模块；

10)提供双层光路、电动六工位荧光激发转盘，长寿命高压汞灯130W照明；

11)激发波长包括：

a)紫外：EX330-380，DM400，BA410；

b)蓝色：EX450-490，DM505，BA510；

c)绿色：EX510-560 ，DM575，BA580；

d)橙色：EX540-580、 DM595、BA600；

e)配套电动滤光镜转盘，提供滤光镜系列，满足10种荧光探针的成像需求；

12)防漂移硬件系统：完美对焦系统855nm LED光源，兼容塑料培养皿以及多孔板。不受观察方式限制（荧光，明场透射光，DIC，相差，TIRF等）；

13)物镜：专用平场复消色差物镜高数值孔径物镜，并带有纳米镀膜的全波长色差校正系统：

a)4×干镜，N.A. 0.20，W.D. 2.0；

b)10×干镜，N.A. 0.45，W.D. 4.0mm；

c)20×干镜，N.A. 0.75，W.D. 1.0mm；

d)40×干镜，N.A. 0.95，W.D. 0.23mm；

e)60×油镜，N.A. 1.40，W.D. 0.13mm；

f)长工作距离超级荧光20X物镜： N.A. 0.45, W.D. 8.2-6.9mm，培养皿底厚校正： 0-2.0mm；

g)长工作距离超级荧光物镜40X，N.A. 0.60, W.D. 3.6-2.8mm,培养皿底厚校正： 0-2.0mm；

7.高清晰、高感光度和信噪比电子放大型成像系统：

1)大尺寸芯片，5056 x 2968像素点，配套NIKON 25视野输出成像；

2)量子效率（QE）峰值：73%；

3)芯片尺寸：21.49x12.61mm，对角线尺寸不低于24.9mm；

4)16bit数据输出全幅全分辨率采集帧速30 fps（5056x2968）、59fps（5056x1500）；

8.高级图像软件部分：

1)3D图形获取, 处理；

2)三维（X, Y, Z）共聚焦图像获取, 重建三维可视图象, 随意进行空间切割；

3)六维（X, Y, Z, T, λ, Multipoint）图像重建，六维成像时可同时进行大视野拼接；

4)共位性定量分析：对于双标或多标波长的荧光图像进行叠加、共位定量分析；

5)四色荧光大图拼接在40X物镜下的扫描，亮度正常情况下快速拼接时间为168秒；

6)具有图像分析功能：每个参数的共定位和图表分析，直线的轮廓测量。长度，角度，面积，亮度或其他参数 (50种参数)的自动测量及分析功能；

7)一次扫描可获得32幅不同光谱的荧光图，以便检测特异荧光标本光谱；

8)串色分离软件，用于样品中两种或多种光谱有重叠的染料的分离，以及自发荧光与染料荧光的分离；

9)实时拆分光谱：精确到单个像素点的荧光光谱检测；

10)选定的区域荧光强度、各色荧光比率测量；

11)延时摄影：支持时间序列扫描和获取图像（X、Y、T、t和X、Y、Z、T、λ、point）, 重建时间序列动态图像, 以及按照时间序列对相应图像进行分析；

12)荧光漂白后恢复（FRAP）：提供AOTF对特异性生物大分子进行定点漂白实验。光刺激和拍摄可同时进行；

13)受体漂白型（FRET）实验：提供AOTF功能对受体进行定点漂白, 然后对供体荧光进行分析。光刺激和拍摄可同时进行；

14)光活化实验（Photo Activation）：提供对PA-GFP等光活化探针进行定点刺激。光刺激和拍摄可同时进行；

15)通过命令历史，录制，编程等方式获取Macro文件，进行功能扩；

16)建立在window 10系统上，使用先进程序语言，程序执行效率高，快，稳定，不容易出错。

9.计算机工作站：HP Z4G4 Workstation：Xeon W-2123 (3.66GHz, 4Cores)，Memory 32GB， 1st: HP Z Turbo G2 512GB PCIe M.2 SSD 2nd: SATA HDD 2TB，10/100/1000 Network Interface，NVIDIA Quadro P4000，32英寸液晶；

10.气垫式双光子专用防震台：1200X800mm，M6螺孔排列，台面粗糙度0.8~1.6um，不平度0.02~0.05mm/m2自动水平，自动充气，面板采用高导磁不锈钢板；

11.配备稳压电源及UPS，满足断电后30分钟供电能力；

三、应用范围

仪器用于组织切片、活细胞在线培养观察、活细胞的荧光标记、三维图像重建分析研究；细胞生物物质、离子的定性、定量、定时和定位分布检测等，以下为我校医学领域所涉及到的具体应用：

1.活细胞在线培养过程的全程跟踪成像：包括生长、凋亡过程的荧光、DIC成像；

2.组织切片的免疫荧光成像，包括多色荧光成像、大图快速拼接、三维立体成像等；

3.活细胞或组织切片进行连续扫描，可获得精细的细胞骨架、染色体、细胞器和细胞膜系统的三维图像。可以得到比普通荧光显微镜更高对比度、高解析度图象、和具有高灵敏度；

4.高分辨率成像：成像的分辨率接近观察亚细胞结构，如：观察线粒体等；

5.快速成像：对于活体细胞与组织的生长凋亡过程的在线培养全过程自动成像、药物刺激与洗脱的瞬间变化过程的成像，Ca2+活化实验、微循环（血流）过程的快速成像；

6.大批量药物筛选成像、多孔板活体培养的自动成像；

7.多维图象的获得，X、Y、Z、T、λ（光谱波长）、point（区域）等多位组合扫描，根据需要进行多维组合观察。

8.细胞内离子荧光标记，单标记或多标记，检测细胞内如pH值和钠、钙、镁等离子浓度的比率及其动态的变化。

荧光探针标记的活细胞或组织切片标本，膜标记、免疫物质、受体或配体，核酸等观察；可以在同一张样品上同时进行多重荧光标记观察。