一、设备简介
LigandTracer系统应用于配基-受体的相互作用、抗原-抗体相互作用的免疫学、蛋白质组学、医学诊断、药物研发和筛选、疾病治疗等研究,涵盖了蛋白-蛋白互作、蛋白-细胞/组织切片互作、病毒-细胞互作、药物分子-细胞互作、细菌-细胞的结合。
二、检测原理
控制器操作LigandTracer系统运行仪器主机,基于荧光标记的配体与受体的反应,仪器激发器和检测器同时运作,结合软件实时捕获和记录相互作用时冷光等能量的变化,是建立在细胞水平上的、实时测定的方法。
三、功能特色
LigandTracer为科学家提供了一个无需分离膜蛋白、在细胞水平上即可检测蛋白功能的平台,此外它还能在组织或蛋白水平检测靶蛋白质和其他多种生物分子之间的相互作用,并进行实时动力学和亲和力研究。LigandTracer是全球首个可以实时定量蛋白细胞互作的系统,也是首个实现定量细胞表面受体数量的系统。
四、技术参数
荧光检测器:FITC以及波长范围为488nm-535nm相类似的荧光,Rhodamine Red以及波长范围为590nm -632nm 相类似的荧光;
操作软件:具备实时收集互作数据、动力学评估以及分析数据的功能,且须在一台仪器上完成 ;
运行环境:仪器可以在细胞培养箱内操作,同时可以检测一个荧光标记的蛋白和三种不同的细胞系互作关系
五、应用范围
亲和力是生物分子反应达到平衡(稳态)时的理论,它反映结合的强度。动力学是研究分子间是怎样相互作用并达到稳态的,反映结合的快慢。
LigandTracer实时反映动力学互作全过程,相同的亲和力,却有二种不同结合解离的动力学过程。这是传统终点饱和法无法获知的。对于fast on- fast off类型的蛋白互作来说,它可能在短时间内即达到平衡后不久开始解离,但若孵育时间长可能会在洗脱过程之前就开始解离、当洗脱后可能已全部解离,终点法测定会误以为根本没有结合;而对slow on- slow off类型来说,为达到动态平衡往往需要数小时甚至数天,但因曲线趋势变化很微弱,往往会被误以为已经达到平衡;如果单独靠进一步延长孵育时间,又存在抗体蛋白被细胞代谢掉的危险,从而结果也不准确。这些动力学相关的信息在新药筛选方面会更加有用,例如要求效果快速的安眠药就必须是快速与受体结合,而要求药效时间长的止痛药则需要解离慢且与受体结合时间长久。