一、设备简介
LSM 900 Airyscan是集成了当今顶尖的光学成像和光电控制技术的新一代激光扫描共聚焦显微镜系统。它综合运用了众多的专利技术，具有成像分辨率高、检测灵敏度好、采集速度快的特点。作为综合性的成像平台，LSM 900不仅具有优异的激光共聚焦显微镜性能，而且可以实现超高分辨率成像、FRAP、FRET等不同的功能以满足多种不同样品的实验需求。
使用LSM900 Airyscan激光共聚焦显微镜，研究者能够采集组织或细胞内部的荧光标记信号，在细胞、亚细胞水平观察组织或细胞的形态学变化和内部微细结构、对样品进行断层扫描并重构和分析组织或细胞的三维空间结构、观察重要离子浓度的变化等。
二、功能介绍
1）共聚焦图像采集
使用高数值孔径平场复消色差共聚焦专用物镜，对冰冻切片、石蜡切片、爬片细胞、培养细胞、水凝胶、胶原蛋白、带荧光的材料样品以及诸如斑马鱼、果蝇胚胎、线虫、拟南芥等模式动物样品进行多色荧光图像采集。
培养的神经元细胞 |
培养的大鼠肾细胞 |
（2）快速超高分辨率成像
使用Airyscan 2快速超分辨率模块，对亚细胞精细结构、细胞器等进行多色荧光超分辨率成像，以及对钙信号、细胞骨架运动等快速动态过程进行细节捕捉。
（3）活细胞动态图像采集
使用时间序列成像功能，采集样品多色荧光动态视频。
（4）三维图像采集和重构
在共聚焦或超高分辨率模式下对组织切片、细胞样品进行连续Z轴（Z-stack）光学切面多色荧光成像，并可进行三维重构，从而获得精细的单个细胞或组织切片的各个层面结构的三维图像。
细胞内部结构三维重构 |
植物花粉粒三维重构 |
（5）荧光定量分析
使用ZEN软件的荧光定量分析功能，可以对图像中任意选择区域设置背景阈值，进行荧光定量分析，测定选定区域各通道荧光强度数值；对动态图像的荧光强度变化进行实时或离线荧光强度测定，得到选定区域各通道荧光强度随时间的变化曲线。
（6）荧光共定位分析
在多通道荧光图像中，基于单个像素荧光强度测定方法，进行两个荧光通道之间的共定位量化测定。用于分析多荧光共表达或蛋白、分子之间相互作用的辅助分析判断。
（7）光谱扫描和光谱拆分
采用VSD线性分光方式，2个通道同时进行可见光谱的图像（450-650 nm)采集，达到1nm光谱分辨率。并通过ZEN软件内置的线性拆分功能（Linear Unmixing），能够快速将样品中自发荧光和荧光染料波谱交叉产生的串色荧光去除，得到更真实的荧光信号。
（8）钙离子成像
可以直接使用单波长钙离子染料（Fluo-3/Fluo-4/Calcium Green/Calcium Orange/Oregon Green 等）和双波长激发染料（Fura-2）直接成像或进行比例法成像（fluorescence ratio imaging），采集快速变化的钙信号动态影像，并进行定量分析。
（9）FRAP（荧光漂白后恢复）实验
使用各个波长激光（如405nm）对预先获取图像的任意选定位置、形状、大小的区域进行设定强度和次数的漂白和刺激活化，同时对活细胞荧光恢复全过程进行实时图像采集和量化，得到漂白-恢复曲线，并计算恢复曲线的时间常数。
(10) FRET（Forster Resonance Energy Transfer）实验
配备FRET专业软件模块，具有多种FRET实验方法：Acceptor Photobleaching和 Sensitized Emission，是用于对生物大分子之间相互作用定性、定量检测的一种有效方法。
三、培训内容及日程安排
1、培训内容：
LSM 900(with Airyscan 2) 应用与上机操作培训
2、日程安排：
2024年6月13日（周四）
1）14:30-15:30 LSM 900原理及应用（不限人数）
讲座地点： 科创中心H204会议室
2） 2024年6月13日15:30-17:30上机操作（限报6人）
2024年6月14日 9:30-12:00 上机操作（限报6人）
培训地点：科创中心C103
3、主讲人：陈秀秀 ZEISS 技术工程师
4、联系人：吴老师 15550461206
5、报名链接：https://lab.sdfmu.edu.cn/client/offlinetraining/detail/297
